Co柱常见问题及解决方案

在水溶液中，过渡金属离子（如Zn²⁺、Cu²⁺、Ni²⁺和Co²⁺）与组氨酸和半胱氨酸间具有亲和作用，IMAC正是以此亲和力为基础。将此方法延伸应用，使金属离子“强固定"于载体达到蛋白质分级分离的目的。

应根据具体应用目的选择固定于IMAC配基的金属离子。三价阳离子，如Al³⁺、Ga³⁺和Fe³⁺或四价Zr⁴⁺更适合捕获磷酸化蛋白质和磷酸化肽，二价Cu²⁺、Ni²⁺、Zn²⁺和Co²⁺常用于纯化His标记蛋白质。联合使用四配位配基，可以确保固定化牢固，而且金属离子（Ni²⁺、Co²⁺）保留两个自由配位键与生物高分子相互作用时，接受能力更高，同时回收率和洗脱蛋白质纯度无明显变化。

月旭金属螯合亲和介质主推Ni（NTA/IDA）、Co（NTA），今天主要介绍下Co Tanrose 6FF（NTA）的基本参数与常见问题。

• Co Tanrose 6FF （NTA）

Co Tanrose 6FF（NTA）是以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，氨三乙酸偶联于琼脂糖而成，之后螯合Co²⁺。钴NTA琼脂糖凝胶FF特异性好，螯合钴更稳定，不易脱落，能耐受更高的还原剂，物理和化学稳定性好。

• 产品参数

解决方案：①裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上柱前使用滤膜（0.22或0.45μm）过滤，或者离心去除。

②样品中含有高浓度的核酸，加长破碎时间直至粘度降低，或者添加DNase I（终浓度5μg/ml），Mg²⁺（终浓度1mM），冰上孵育10-15分钟。

2、样品太粘稠

解决方案：有机溶剂或者蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。

解决方案：可以通过电泳检测裂解液分析上清中是否含有目的蛋白，包涵体蛋白需要按照包涵体蛋白的纯化方式。

2、表达量太低

3、目的蛋白结合比较弱，在洗杂步骤被洗下来了

解决方案：提高Wash Buffer的pH，或者降低咪唑浓度。

4、目的蛋白结合过强，不容易洗脱下来

解决方案：降低Elution Buffer的pH值，或者增加Elution Buffer中咪唑浓度。

5、蛋白降解

解决方案：菌体破碎时添加一些蛋白酶抑制剂。在4°C下进行纯化操作。 

解决方案：增加Wash Buffer体积。

2、样品中含有其他的组氨酸标签蛋白

解决方案：通过调节pH值，或者咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他的纯化手段（如离子交换、疏水等）进一步纯化洗脱组分。

解决方案：适当降低还原剂DTT的浓度，或者改用巯基乙醇。

解决方案：室温下进行上样。

2、蛋白发生聚集

解决方案：在样品和所有的缓冲液中添加稳定剂，如0.1%的TritonX-100或者Tween-20。

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