蛋白纯化之蛋白电泳介绍

蛋白电泳（SPE）作为一种蛋白质的分析技术，蛋白质在缓冲液中带负电荷或正电荷，在电场中向阳极移动称为电泳，不同的蛋白质分子具有不同的电泳迁移率。常见的蛋白电泳有纸电泳、淀粉凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳、醋酸纤维凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳。

其中十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，简称SDS-PAGE）是聚丙烯酰胺凝胶电泳中zui常用的一种蛋白表达分析技术。此项技术的原理，是根据检体中蛋白质分子量大小的不同，使其在电泳胶中分离。

蛋白中含有很多的氨基(+)和羧基(-)，不同的蛋白在不同的pH值下表现出不同的电荷，为了使蛋白在电泳中的迁移率只与分子量有关，我们在上样前，通常会进行一些处理(上样缓冲液)。即在样品中加入含有SDS 和β-巯基乙醇的上缓冲液。

SDS 即十二烷基磺酸钠（CH₃-(CH₂)₁₀-CH₂OSO₃- Na+），是一种阴离子表面活性剂，它可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构；β-巯基乙醇是强还原剂，它可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键。

电泳样品加入样品处理液后，经过高温处理，其目的是将SDS与蛋白质充分结合，以使蛋白质*变性和解聚，并形成棒状结构同时使整个蛋白带上负电荷；另外样品处理液中通常还加入溴酚蓝染料，用于监控整个电泳过程；另外样品处理液中还加入适量的蔗糖或甘油以增大溶液密度，使加样时样品溶液可以快速沉入样品凹槽底部。当样品上样并接通两极间电流后(电泳槽的上方为负极，下方为正极)，在凝胶中形成移动界面并带动凝胶中所含SDS负电荷的多肽复合物向正极推进。样品首先通过高度多孔性的浓缩胶，使样品中所含SDS多肽复合物在分离胶表面聚集成一条很薄的区带（或称积层）。当蛋白质进入分离胶时，其他离子在pH8.8的溶液中，很快到达正极，只有蛋白质分子在分离胶中较为缓慢的移动。由于蛋白质在电泳过程中，受到溶液离子的变化而pH值发生变化，但每一瞬间，其所带电荷数除以单位质量是不同的，所以带负电荷多者迁移快，反之则慢，这就现了电荷效应。由于胶孔径小，而且成为一个整体的筛状结构，它们对大分子阻力大，小分子阻力小，起着分子筛效应，也就是蛋白质在分离胶中，以分子筛效应和电荷效应而出现迁移率的差异，最终达到彼此分开。

蛋白电泳是蛋白纯化后期检测的方法之一，整个的蛋白纯化前期对于填料的选择是至关重要的。月旭科技推出的蛋白纯化填料包括凝胶过滤层析介质、离子交换层析介质、疏水作用层析介质、亲和层析介质等，分离效果好，性价比高，是你的优选。